shkolakz.ru 1 ... 28 29 30 31 32

Приложение 10 (обязательное)

Метод определения сальмонелл в сточных водах

Для обнаружения сальмонелл в сточных водах используют не менее двух сред накопления: магнивую, селенитовый бульон, Кауфмана, среду с охмеленным суслом и др. Приготовление питательных сред по МУ 2285-81.

Схема посева сточной воды до очистки, после биологической очистки до обеззараживания: 100 мл засевают в равное количество среды накопления удвоенной концентрации, 10 мл сточной жидкости засевают в 100 мл среды нормальной концентрации, 1 мл стока вносят в 10 мл среды нормальной концентрации. Схема посева сточной воды после обеззараживания: 500 мл стока вносят в магнивую среду экспедиционной прописи; 500 мл - в такое же количество одной из других сред накопления удвоенной концентрации.

Посевы инкубируют при температуре 37 °С 18-20 часов. На следующий день при помутнении из сред накопления делают высев петлёй на две чашки с висмут-сульфитным агаром с таким расчётом, чтобы получить изолированные колонии. Среды накопления выращивают в термостате до 48 часов, чашки с посевами инкубируют при температуре 37 °С и просматривают через 18-24 часа. При отсутствии роста на чашках через 24 часа, их оставляют в термостате для последующего просмотра через 48 часов, а из сред накопления делают повторный высев на висмут-сульфитный агар. На висмут-сульфитном агаре колонии сальмонелл - круглые чёрные с сероватым металлическим блеском вокруг них, зелёные с чёрным центром и без него, вызывающие потемнение среды под колонией. С каждой чашки снимают по 4-5 типичных для сальмонелл колоний на комбинированную среду, позволяющую устанавливать ферментацию глюкозы, лактозы, сахарозы, образование сероводорода, расщепление мочевины (среды Ресселя, Олькеницкого и др.). При обнаружении на комбинированной среде типичной для сальмонелл реакции (ферментируют глюкозу, не расщепляют лактозу, сахарозу и мочевину, образуют сероводород) проводят серологическую идентификацию по определению серотипа по общепринятой методике.

Приложение 11 (обязательное)

Метод определения колифагов в сточных водах

Колифаги – бактериальные вирусы, способные лизировать E.coli и формировать при температуре 37 (± 1) °С через 18 (± 2) часа зоны лизиса на питательном агаре.

1. Определение колифагов в сточной воде проводится методом прямого посева 3 объёмов: до очистки - 0,1 мл, 1 мл и 10 мл; после очистки - по 10 мл из одной пробы с последующим учётом зон лизиса (бляшек) на газоне Е.соli К12 F+ в чашках Петри с питательным агаром. Для контроля используют чашку с чистым газоном Е.соli К12 F+ на питательном агаре.

2. Проведение анализа.

За 24 часа до проведения анализа необходимо произвести посев детекторной культуры Е.соli К12 F+ на косяк с питательным агаром. Перед проведением анализа сделать смыв бактерий 5 мл стерильной водопроводной воды и по стандарту мутности приготовить взвесь культуры Е.соli в концентрации 109 бактериальных клеток в 1 мл.

Расплавить и остудить до 45 °С 2 %-ный питательный агар (Хоттингера, МПА, на гидролизате кильки). Объём пробы 50 мл предварительно обработать 5 мл хлороформа путём интенсивного встряхивания в течение 15 минут и затем поставить пробу для полного осаждения хлороформа. Исследуемую воду внести в 3 стерильных чашки Петри по 10 мл в каждую. В остуженный питательный агар добавить смыв Е.соli из расчёта 1,0 мл смыва бактерий (в концентрации 109 бактериальных клеток в 1 мл) на 100 мл агара и осторожно перемешать. Полученной смесью по 15 мл залить сначала пустую чашку Петри (контроль газона Е.соli), а затем все чашки, содержащие исследуемую воду. Содержимое чашек (10 мл пробы и 15 мл агара) осторожно перемешать лёгким покачиванием. Чашки оставить при комнатной температуре для застывания на 30 минут, затем перевернуть и дном вверх поместить в термостат на 18 часов при температуре + 37 °С.

3. Учёт результатов.

Учёт производят путём подсчёта и суммирования бляшек, выросших на 3 чашках Петри в посеянном объёме с последующим пересчётом результата, выраженного в бляшкообразующих единицах (БОЕ) на 100 мл пробы воды. В контрольной чашке колифаги должны отсутствовать. При наличии бляшек в контрольной чашке результат не учитывается. Необходимо повторить анализ с новой культурой этого же штамма Е.соli К12 F+, приготовленного из другой ампулы.


<< предыдущая страница   следующая страница >>